上海通蔚生物科技有限公司人白細胞介素 -8(IL -8)ELISA 試劑盒的原理
人白細胞介素 -8(IL -8)ELISA 試劑盒的原理是基于抗原抗體的特異性免疫反應,具體如下:
1. 包被:將針對人 IL -8 的特異性抗體(捕獲抗體)預先包被在酶標板的孔中。這種包被過程使得抗體能夠牢固地結(jié)合在孔壁上,等待與樣本中的 IL -8 抗原結(jié)合。
2. 加樣:將待檢測的樣本(如血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液等)加入到包被有抗體的酶標板孔中。樣本中的 IL -8 抗原會特異性地與包被在孔壁上的捕獲抗體結(jié)合,形成抗原 - 抗體復合物。同時,試劑盒通常會提供一系列已知濃度的 IL -8 標準品,與樣本一起進行檢測,用于繪制標準曲線。
3. 洗滌:在樣本與捕獲抗體充分結(jié)合后,需要進行洗滌步驟。通過洗滌,可以去除未結(jié)合的雜質(zhì)、血清蛋白等其他無關(guān)物質(zhì),以減少非特異性反應,確保后續(xù)檢測的準確性。
4. 加酶標抗體:洗滌完成后,向孔中加入酶標記的抗 IL -8 抗體(檢測抗體)。這種酶標抗體能夠特異性地識別并結(jié)合已經(jīng)與捕獲抗體結(jié)合的 IL -8 抗原,形成 “捕獲抗體 -IL -8 抗原 - 酶標抗體” 的三明治結(jié)構(gòu)。
5. 再次洗滌:加入酶標抗體反應一段時間后,再次進行洗滌,以去除未結(jié)合的酶標抗體,避免其對后續(xù)檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾。
6. 顯色:洗滌結(jié)束后,向孔中加入底物溶液。酶標抗體上標記的酶會催化底物發(fā)生化學反應,產(chǎn)生顏色變化。顏色的深淺與樣本中 IL -8 的含量成正比關(guān)系,即樣本中 IL -8 的濃度越高,產(chǎn)生的顏色越深。
7. 測定:使用酶標儀測定酶標板各孔在特定波長下的吸光度值。通過與標準品的吸光度值進行比較,并根據(jù)標準曲線,就可以計算出樣本中 IL -8 的濃度。
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