產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
我司丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒以誠信為科研精神，現(xiàn)擁有分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等檢測平臺，經(jīng)過不斷的努力，已成為國內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域新品的主要供應(yīng)商。
詳情介紹：
丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
PDH(EC 1.2.4.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。
測定原理:
PDH催化丙酮酸脫氫,同時(shí)還原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),從而導(dǎo)致600nm光吸收的減少。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
組織、或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:樣本的前處理:
組織、或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
1、稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g,4℃離心5min。
3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的PDH(此步可選做)。
5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體PDH活性測定。
4 按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);11000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
