線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ/琥珀酸-輔酶Q還原酶測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
線粒體復(fù)合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q還原酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同時(shí)輔基FAD還原為FADH2,后者進(jìn)一步還原氧化型輔酶Q生成還原型輔酶Q,是呼吸電子傳遞鏈的支路。
測定原理:
復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q可進(jìn)一步還原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰,通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計(jì)算該酶活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
測定步驟:
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至605nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
(1)工作液的配制:臨用前把試劑五轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、25μL試劑六和200μL工作液,立即混勻,記錄605nm處初始吸光值A(chǔ)1和 2min后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A1-A2。
